以下文章来源于蔡司征文大赛，作者关苑君，来自中山大学中山医学院科研仪器管理中心

 

研究生时期，第一次接触了蔡司激光共聚焦显微镜LSM 710。记得当时有一个实验需要观察YFP荧光信号，但整个实验楼里都没有一台荧光显微镜配置对应的荧光滤色片组。所以，考虑用激光共聚焦显微镜对该样品进行荧光成像。令人印象深刻的是，在应用工程师王工专业的指导和培训下，实验顺利地开展了。但总有一些意外，就是样品多次失败。（就让回忆停留在那里吧）

 

缘分匪浅，我目前的工作就是与显微镜管理相关，给予我专业帮助最多的依然是蔡司工程师们——带我入门光学显微世界。在成长的过程之中，也有一些意外，我逐步当上显微镜清洁小工，并对这份工作的热爱程度比正式的工作内容都高。

 

显微镜是一套精密的光学设备。刚开始担任清洁小工时，让我认识了给予这套设备生命的每一个部件，物镜、聚光镜、孔径光阑、视场光阑等，感觉微妙而神奇。特别是完成部分部件清洁，调整好科勒照明以后，幸福感油然而生。这份感觉是在蔡司Axio Imager.Z1研究级正置显微镜（点击查看）和Axio Observer.Z1研究级倒置显微镜（点击查看）上获得的。随着工作的深入，又有机会了解到相差显微镜、微分干涉显微镜、活细胞工作站和激光扫描共聚焦显微镜。要使用好这些显微镜，都离不开正确的调节科勒照明。

▲蔡司Axio Observer.Z1研究级倒置荧光显微镜部件

 

 

让人喜爱、给予幸福感的科勒照明到底是什么？

 

科勒照明出现以前，临界照明是最主要的照明方法，其缺点是灯丝像成在样品面、照明不均匀、样品成像效果不佳。十九世纪末，蔡司公司的August Köhler工程师发明了一种优化的照明方法，让灯丝成像在孔径光阑面，平行光通过样品面，从而保证了照明均匀；另外，可调整聚光镜孔径光阑以匹配物镜的数值孔径^[1,2]，从而达到更佳的分辨率和图像对比度。这种二次成像的照明方式命名为“科勒照明”。调节好显微镜的科勒照明后，我们才能顺利开展样品的显微观察之旅。

▲科勒照明的光学设置和显示各种光学元件共轭像面的光路图^[2]

 

工作郁闷时，我就会去清洁显微镜、调科勒照明，心情便能得到舒缓。蔡司显微镜让我逐步爱上清洁这份工作，以至于箱体式的数字玻片扫描系统来到我们部门时，我有种莫名de失落感，因为无法很直接地调整科勒照明了。

 

与目前其他工作内容相比，清洁和调科勒照明是最基础的，但却容易被忽略。做好这份清洁工，也是不忘初心的另外一种绝佳表达方式呢。

▲蔡司Axio Observer.Z1研究级倒置显微镜的10倍物镜下和目镜下的视场光阑像，视场光阑最小时

 

 

最后，和大家分享下调整科勒照明的方法：

1

 

打开显微镜，明场目镜观察照明状态；

调节聚光镜至顶部位置，打开视场光阑和孔径光阑，确认有光照射到样本

2

 

选择10X物镜，通过调焦旋钮，聚焦样品

3

 

关小视场光阑使其在视野内出现一个多边形

4

 

调节聚光镜垂直调节旋钮，至视野内可以看到边缘清晰锐利的多边形（即视场光阑的图像）

5

 

使用聚光镜支架上的两个中心调节旋钮，将视场光阑的图像调节至视野中心

6

 

打开视场光阑使其边缘刚好外切于视野

7

 

取下一个目镜，通过镜筒观察，调节孔径光阑（对比度）

8

调节孔径光阑的位置大约至视野大小的2/3~4/5。

大多数情况下这个位置可以提供较为理想的分辨率和对比度